高效液相色谱法测定积雪草苷片中积雪草苷、羟基积雪草 |
作者 :梁李广 刘华东 | | 更新时间:2012-11-9 |
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摘 要:目的: 建立HPLC测定积雪草苷片含量的方法。方法: 采用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(71︰29),流速1.0 ml·min-1,检测波长205 nm,柱温25℃。结果: 积雪草苷平均回收率为99.5%,RSD=1.06% (n=6); 羟基积雪草苷平均回收率为100.3%,RSD=1.21% (n=6)结论: 所建方法简便,结果准确,可用于积雪草苷片的质量控制。
关键词: 积雪草;积雪草苷;羟基积雪草苷;高效液相色谱法。
中图分类号:R927.2 文献标识码:B 文章编号:1006-0979(2008)02-0035-02
积雪草为伞形科植物积雪草 Centella asiatica (L.) Urb. 的干燥全草,含积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸等化学成分。积雪草苷片为积雪草总苷制成的片,有促进创伤愈合作用。临床用于治疗外伤,手术创伤,烧伤,疤痕疙瘩及硬皮病。积雪草苷片的质量标准采用化学法测定积雪草总苷的含量,本文采用高效液相色谱法测定积雪草苷片中的有效成分积雪草苷、羟基积雪草苷的含量,方法简便,结果准确。
1 实验部分
1.1 仪器与试药: Agilent 1100型高效液相色谱仪,包括UV检测器,Agilent 1100色谱工作站,积雪草苷、羟基积雪草苷对照品由广西昌洲天然产物开发有限公司提供,积雪草苷片为市售品,乙腈为色谱纯,水为娃哈哈纯净水。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件:采用Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(29︰71),流速1.0 ml·min-1,检测波长205 nm,柱温25℃。 进样量20μl。在上述条件下,各成分无干扰且实现完全分离(图1)。
图1 积雪草苷+羟基积雪草苷对照品(A)和积雪草苷片溶液(B)的色谱图
1.2.2 溶液的制备:取积雪草苷、羟基积雪草苷对照品各20 mg ,精密称定,置25 ml 量瓶中,刻度,摇匀,即得对照品溶液原液;精密吸取对照品溶液原液5ml加30%的乙腈稀释至10ml,即得对照品溶液。精密取积雪草苷片10片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(约相当于积雪草苷总苷30 mg),置25 ml 量瓶中,加30%的乙腈适量,振摇使积雪草苷溶解并并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。
1.2.3 线性范围考察:分别精密吸取积雪草苷、羟基积雪草苷对照液原2ml、4ml、6ml、8ml,置10ml 量瓶中,加30%的乙腈稀释至刻度,分别吸取上述稀释液及对照液原液各20μl,进样,记录峰面积。以积雪草苷浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,回归方程为A=4890C-13.16,(r=0.9999), 另以羟基积雪草苷浓度(mg/ml)为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,回归方程为A=5174C+13.26,(r=0.9999),结果表明,积雪草苷、羟基积雪草苷进样量3.2~16μg与峰面积呈良好的线性关系。
1.2.4 精密度考察:取积雪草苷、羟基积雪草苷对照液,重复进样6次,计算RSD,积雪草苷、羟基积雪草苷的RSD分别为0.66%和0.73%。
1.2.5 重复性实验:精密吸取积雪草苷、羟基积雪草苷对照品溶液5ml、置10ml 量瓶中,加30%的乙腈稀释至刻度,作为对照品溶液,吸取20μl,进样,另吸取供试品溶液20μl,按外标法计算含量,积雪草苷和羟基积雪草苷RSD分别为0.83%和0.75%。
1.2.6 稳定性实验:分别取放置3、6、24 h的供试品溶液20μl进样,峰面积的RSD分别为0.86%和0.90%,表明供试品溶液在24 h内稳定。
1.2.7 加样回收实验:精密称取积雪草苷片样品6份,依次精密加入不同量的积雪草苷和羟基积雪草苷对照品,按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液,取对照品溶液和供试品溶液20μl依次进样,记录峰面积,按外标法计算含量,并计算回收率。积雪草苷的平均回收率为99.5%,RSD=1.06%(n=6),羟基积雪草苷的平均回收率为100.3%,RSD=1.21%(n=6)。
1.2.8 样品测定:分别吸取对照品溶液和供试品溶液20μl进样,记录峰面积,按外标法计算含量。测定结果为每片样品中含积雪草苷为0.86mg,羟基积雪草苷2.76mg。
2 讨 论
2.1 积雪草苷片的标示量为6mg/片,测定结果积雪草苷和羟基积雪草苷的含量总和低于标示量,是由于本品中还含有其他成分所致。
2.2 本实验比较了乙腈-水系统和甲醇-水系统,由于甲醇在205nm波长处干扰较大而采用了末端吸收较小的乙腈-水系统。
参考文献
[1]张蕾磊等.RP-HPLC 法测定积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷[J].中草药,2007,38(3):455-456. 职称论文发表网http://www.issncn.com
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