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HPLC法测定消渴灵胶囊中葛根素的含量

作者 :赵宇菁更新时间:2012-11-9

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摘 要:目的:建立消渴灵胶囊中葛根素的含量测定方法。方法:HPLC法,KROM-C18柱,甲醇—水(26:74)为流动相,检测波长250nm。结果:此方法线性关系良好(r =0.9999),平均回收率98.8%,RSD为0.85% (n=6)。结论:方法简便,准确,可用于消渴灵胶囊的质量控制。

关键词:消渴灵胶囊;葛根素;HPLC

消渴灵胶囊由葛根、人参、麦冬等药物组成,具有生津止渴、养阴滋肾、益气和中之功效,用于治疗多尿、多饮、消瘦,尿糖、血糖升高之阴虚燥热型消渴症。葛根为方中主药之一,其主要有效成分为葛根素,为控制产品质量,采用HPLC法对葛根素含量测定,该法操作简单、准确、重现性好。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪:岛津LC-2010HAT系列二元梯度泵 、岛津LC-2010HAT自动进样器、岛津LC-2010HAT紫外检测器、岛津LC-2010HAT色谱工作站;葛根素对照品(供含量测定,批号 0752-9907)购自中国药品生物制品检定所,纯度为99.71%;3批样品(自制);所用试剂均为分析纯。

2 色谱条件

色谱柱:Phenomex C18柱 (4.6×250mm,5μm),流动相:甲醇-水(26:74),检测波长:250nm;柱温:室温;流速:1.0ml·min-1;在此条件下葛根素峰的理论板数为5468,供试品色谱中葛根素与其它组分均达到分离效果良好。

3 方法与结果

3.1 供试溶液制备

3.1.1 供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内容物,混匀,研细,取细粉1.0g精密称定,置50mL量瓶中,精密加入30%乙醇定容,称定重量,超声处理30min,,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失重量,摇匀滤过,取续滤液作为供试品溶液。

3.1.2 对照品溶液的制备:精密称取葛根素对照品适量,置容量瓶中,加30%乙醇制成每1ml含108µg的溶液,作为对照品溶液。

3.1.3 阴性对照溶液的制备:取不含葛根的样品,按3.3.1项下方法制成阴性对照溶液。

3.2 方法学考察

3.2.1 检测波长的选择:对葛根素对照品溶液在200-400nm范围内扫描,结果在波长250nm处有最大吸收,故确定检测波长为250nm。

3.2.2 线性关系的考察:将葛根素对照品配制成1ml含108µg的甲醇溶液,依次准确进样2,4,6,8,10μL,依上述色谱条件测定,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,计算回归方程为:Y=57632.7X+462.5;r=0.9999。表明葛根素含量在0.202-1.08μg范围内,浓度与峰面积值显良好线性关系。

3.3 精密度试验:精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10µl,重复进样5次依法测定,其峰面积相对标准偏差(RSD)分别为0.45%,0.68%,说明进样精密度良好。

3.4 稳定性试验: 精密吸取供试品溶液10µl分别于0,1,2,3,4h各进样一次,依法测定峰面积RSD为0.83%。说明在4.0小时内测定,其结果稳定。

3.5 重复性试验:取供试品1.0g(批号20040501)共5份,精密称定,按照供试品溶液制备方法制得供试品溶液,精密吸取供试品溶液10µL,进样测定,结果葛根素含量平均值0.47mg/粒,RSD值为1.58%。

3.6 加样回收率试验:取已知含量的样品(批号20040501),共5份,研细,精密称定分别加入不同量的葛根素对照品,依法测定计算含量,结果平均回收率为98.8%,RSD值为0.85(n=6)。

3.8 样品测定:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl,测定含量三批含量分别为0.47、0.51、0.44 mg/粒,RSD值为1.58、1.21、0.93(n=4)。 职称论文发表网http://www.issncn.com 职称论文发表网http://www.issncn.com

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