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(贵州省黔西南州药品检验所 贵州 兴义 562400)
摘 要:建立同时测定痛宁胶囊中乙酰水杨酸和咖啡因含量的方法。方法 采用ODS柱,流动相:乙腈-水-甲酸(20∶30∶1),流速1.0ml/min,检测波长276nm,外标法计算。结果 线性范围分别是:乙酰水杨酸0.3~3.0㎎.ml-1, r=0.9999;咖啡因0.03~0.28㎎.ml-1,r=0.9999,RSD分别为0.8%、1.2%。结论 本法操作简便,结果准确,可以有效地控制质量。
关键词:高效液相色谱法 乙酰水杨酸 咖啡因
痛宁胶囊系由乙酰水杨酸、咖啡因等组成的复方制剂,,主要用于镇痛消炎等。现行检验标准⑴是采用滴定法分别测定乙酰水杨酸和咖啡因的含量,本文采用HPLC法同时测定该品种中两组分含量,取得满意效果,结果如下:
1 仪器与试药
Waters1525高效液相色谱仪,2487检测器(均为美国Waters公司);乙酰水杨酸对照品、咖啡因对照品(均由中国药品生物制品检定所提供);乙腈为色谱纯,痛宁胶囊(贵州圣都制药有限公司,批号06121028、07021005、07021006)。
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
1、精密称取105℃干燥至恒重的乙酰水杨酸和咖啡因对照品适量,用流动相作溶剂分别稀释至50ml制成含乙酰水杨酸6mg/ml和咖啡因0.7mg/ml的浓溶液备用;
2、分别取上述浓溶液各2ml,稀释至10ml制成含乙酰水杨酸1.2mg/ml的对照溶液①、含咖啡因0.14mg/ml的对照溶液②及含上述浓度的乙酰水杨酸+咖啡因混合对照溶液③备用;
3、按样品相同处方配制空白辅料,按上述方法处理后制成空白对照溶液④,备用。
2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:C18柱(4.6×250nm),流动相:乙腈-水-甲酸(20∶30∶1),流速:1.0ml.min-1,柱温:30℃,进样量:10µl,检测波长:276nm。分离图谱及保留时间的确定:分别取2.1.2下对照溶液①②③和空白对照溶液,分别进样,记录色谱图。
① ② ③
图、①乙酰水杨酸; ②、咖啡因;
③、乙酰水杨酸+咖啡因 ④、空白
结果表明,乙酰水杨酸和咖啡因分离良好,分离度大于9,拖尾因子分别为0.89和0.88;溶剂及辅料不干扰测定。测得理论塔板数按咖啡因的峰面积计算为2800。
2.3 线性试验 精密吸取2.1项下制备的乙酰水杨酸和咖啡因对照品浓溶液各1至10ml,用流动相定容至10ml制成混合溶液,测定,结果乙酰水杨酸、咖啡因回归方程分别为:
A阿=1875728X+65136,r=0.9999 A咖=1615002X+51992,r=0.9999
线性范围分别为0.3~3.0㎎.ml-1与 0.03~0.28㎎.ml-1。
2.4 精密度试验 精密吸取2.3项下混合溶液,进样,计算乙酰水杨酸RSD为0.5%,咖啡因RSD为0.4%(n=6)。
2.5 稳定性试验 精密吸取2.3项下混合溶液,在0~10h内每隔0.5h进样,24h后再次进样,计算乙酰水杨酸RSD为0.5%,咖啡因RSD为0.4%。(n=12)
2.6 回收率试验 在已知含量样品中精密加入已知量的乙酰水杨酸和咖啡因,依法测定,计算回收率。结果见表。
2.7 样品测定 1、取样品10片,精密称定后研细,精密称取适量(约相当于乙酰水杨酸0.1g),依法制备成供试品溶液,测定,图谱见图。按外标法以峰面积计算每片中乙酰水杨酸与咖啡因的标示含量。2、依检验标准方法测定样品含量。结果见表。
表 样品测定
乙酰水杨酸 (%) 咖啡因 (%)
HPLC RSD 滴定法 HPLC RSD 滴定法
回收率 n=3 低 98.6 0.4 99.6 0.3
中 100.2 0.5 100.4 0.2
高 100.5 0.5 99.8 0.4
含量测定
06091022 n=2 97.7 98.8 96.0 101.6
06111026 97.0 99.8 95.7 105.2
07021006 99.7 98.6 97.6 102.1
注:滴定法:指用检验标准方法测得的样品含量。
3 讨论
3.1 分别取对照品适量,用流动相稀释至适宜浓度,在230~350nm区间作UV-Time扫描,结果显示咖啡因λmax为 273nm,±3nm区间∣λ-λmax∣≤0.021,吸收值很稳定;乙酰水杨酸λmax为 276nm,±3nm区间∣λ-λmax∣≤0.008,综合其存在的水解性质,选择了276nm为检测波长。
3.2 流动相⑵⑶组成中,调整乙腈-水的比例对乙酰水杨酸的保留时间和拖尾因子作用明显,甲酸是抑制其水解,最后选择流动相组成为乙腈-水-甲酸(20∶30∶1)。
3.3 咖啡因对照品经105℃干燥至恒重即为无水咖啡因,测得结果×1.093换算成样品中含水咖啡因。
参考文献:
⑴ 国家药品监督管理局《国家药品标准》(WS-10001-(HD-0235)-2002)。
⑵ 魏玲,俞如英. HPLC法测定阿斯匹林肠溶片中水杨酸的溶媒考察,药物分析杂志,2001,21(4):298
⑶ BP.[S].2002.160
职称论文发表网http://www.issncn.com
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